Reaction Mix (25ul):
| Tail DNA | 2.0ul |
| NTPs | 0.5ul |
| 10x PCR buffer | 2.5ul |
| AV 63 | 0.05ul |
| AV 64 | 0.05ul |
| AV 103 | 0.05ul |
| AV 106 | 0.05ul |
| milliQ | 19.6ul |
| Taq (1/10) | 0.2ul |
10X PCR Buffer:
| 500 mM KCl |
| 100mM Tris pH 8.3 |
| 15 mM MgCl2 |
| 1 mg/ml BSA |
| 2 mM dNTPs |
| dH20 |
(store at -20º C)
PCR Primers: all used at 100um
| AV 63 | 5' TTG CAC TCT TAA CGG AAG GC 3' |
| AV 64 | 5' AAT TGC ATC GTG TTC CAC C 3’ |
| AV 103 | 5' AAA GGC TCT TTC AGT GTT TCG CCG 3' |
| AV 106 | 5’ AGC TAG CTT GGC TGG ACG TAA ACT 3’ |
PCR Conditions:
| 1. | 94C | 5:00 |
| 2. | 94C | 0:30 |
| 3. | 55C | 1:00 |
| 4. | 72C | 1:00 |
| 5. | Goto 2 x34 cycles | |
| 6. | 72C | 5:00 |
| 7. | 4C | 0:00 |
| END | ||
Expected Bands:
| WT 590bp |
| Mut KO 310bp |